Kiểm tra sinh học

Phép thử mtt dựa trên sự phân cắt của muối tetrazolium màu vàng của mtt để tạo thành formazan màu tím. Việc giảm số lượng tế bào sống sót làm giảm hoạt động trao đổi chất trong các mẫu cấy thử nghiệm. Sự giảm này liên quan trực tiếp đến lượng tạo formazan màu tím được quan sát bằng cách hấp thụ.

Bạn Đang Xem: Kiểm tra sinh học

Sự tăng sinh tế bào được đo bằng phương pháp mtt và khả năng sống sót của tế bào sau khi xử lý thuốc thử được đo bằng phương pháp so màu.

Phương pháp chiết xuất và nhuộm mtt để đánh giá khả năng sống sót của tế bào

• Ủ các tế bào L929 với dịch chiết bằng cách lắc trong dmem được bổ sung 37% fbs trong thời gian chỉ định ở 1 +/- 10 ° C.
• Ngay trước khi kết thúc thời gian ủ bệnh, đánh giá tế bào bằng kính hiển vi và thêm thuốc thử mtt. Các tế bào được ủ trong khoảng 2 giờ. Sau đó, một dung dịch hòa tan (hcl) được thêm vào mỗi giếng và độ hấp thụ được đo ở bước sóng 570 nm (bước sóng tiêu chuẩn 650 nm).
• Các mẫu cấy được xử lý bằng dịch chiết thử nghiệm có tỷ lệ sống thấp hơn 70% so với các mẫu cấy đối chứng không được xử lý (đối chứng bằng dung môi) và được coi là có tác dụng gây độc tế bào rõ ràng theo iso 10993-5.

Thỏa thuận

Dòng ô

Tế bào l929 (số atcc ccl1, bản sao nctc 929 (mô liên kết của chuột), bản sao của chủng l (dsmz))

Nghiên cứu

Phép thử mtt dựa trên sự phân cắt của muối tetrazolium màu vàng mtt để tạo thành formazan màu tím.

Xem Thêm : Mui xe là gì? Ưu điểm và hạn chế của xe mui trần

Mức độ tập trung

4 nồng độ chiết xuất được thử nghiệm: 29,6%, 44,4%, 66,7% và 100%

Thời gian trích xuất

37-1 giờ ở 4 ± 72 ° c

– 4 giờ (phơi nhiễm ngắn hạn và da hoặc niêm mạc còn nguyên vẹn) 24 ± 2 giờ (bệnh nhân tiếp xúc ngắn hạn và hạn chế) 72 ± 2 giờ (phơi nhiễm lâu dài và dài hạn)

p >

Khoảng thời gian chờ

37-1 giờ ở 24 ± 72 ° c

Xem Thêm : Có thể bạn chưa biết: Dạm hỏi và ý nghĩa của dạm hỏi

QA

Kiểm soát dung môi: dmem 10% fbs

Kiểm soát tiêu cực: polypropylene được chiết xuất trong dmem 10% fbs

Kiểm soát tích cực: chiết xuất latex ở dmem 10% fbs

Cung cấp dữ liệu

Khả năng tồn tại của tế bào được xác định bằng độ hấp thụ ở bước sóng 570 nm (bước sóng tham chiếu 650 nm)

Dự báo tích cực

Các mẫu cấy được xử lý bằng dịch chiết thử nghiệm như một tác nhân gây độc tế bào có khả năng sống sót của các tế bào trong suốt thấp hơn 70% so với các mẫu cấy không được xử lý (đối chứng bằng dung môi).