Kỹ thuật ELISA là gì và những điều cần lưu ý khi thực hiện kỹ thuật này

elisa là một công nghệ được sử dụng chủ yếu trong miễn dịch học, được sử dụng rộng rãi trong y học, thực phẩm, nông nghiệp … Trong y học, công nghệ elisa được sử dụng trong lĩnh vực y học. Kiểm tra hiv, viêm gan siêu vi hoặc nhiễm ký sinh trùng, …

1. nguyên tắc công nghệ elisa

elisa (xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym) là một phương pháp sinh hóa được sử dụng chủ yếu trong miễn dịch học để phát hiện sự hiện diện hoặc không có của kháng thể hoặc kháng nguyên trong một mẫu.

Bạn Đang Xem: Kỹ thuật ELISA là gì và những điều cần lưu ý khi thực hiện kỹ thuật này

Tương tự 1: Nguyên tắc Elisa

Nguyên tắc của công nghệ elisa dựa trên tính đặc hiệu của kháng nguyên-kháng thể và tiến hành qua các bước cơ bản sau: một kháng nguyên-kháng nguyên đã biết (kn) hoặc kháng thể-kháng thể (kt) được gắn vào một chất nền rắn, Một mẫu kháng nguyên ( kn) được thêm vào giếng. Thêm kháng thể được liên hợp với enzym. Trong bước cuối cùng của việc thêm chất nền, enzyme sẽ chuyển đổi chất nền và tạo ra một tín hiệu màu có thể đo được bằng máy đo fluorometer.

2. phương pháp elisa

Trực tiếp Elisa:

Phương pháp này thường được sử dụng cho ELISA định tính và hiếm khi định lượng. Ưu điểm của phương pháp này là chỉ cần một lần ủ nên tiết kiệm thời gian và giảm thiểu việc kiểm soát các điều kiện trong quá trình (thay đổi nhiệt độ và dung dịch đệm, thời gian … cho mỗi lần ủ). Tuy nhiên, nó có nhược điểm do sự gắn kết không đặc hiệu của các kháng thể với bề mặt rắn và khả năng bắt màu nền cao của các protein cố định trên bề mặt rắn. Việc ghi nhãn cho mỗi loại kháng thể cho mỗi loại kháng nguyên cũng rất tốn kém, đặc biệt khi phải chẩn đoán một số lượng lớn các loại kháng nguyên khác nhau.

Elisa gián tiếp:

Ưu điểm của phương pháp này là nó có độ nhạy cao và chỉ cần một kháng thể nạp enzyme được tạo ra để nhận ra nhiều loại kháng nguyên khác nhau. Nhưng nhược điểm của nó là làm tăng số bước, do đó tăng khả năng kiểm soát điều kiện, quy trình xét nghiệm, kéo dài thời gian chẩn đoán.

bánh sandwich elisa:

Phương pháp này có nhiều ưu điểm vượt trội, thứ nhất là độ nhạy cao, giảm hiện tượng loang màu nền và phản ứng không đặc hiệu do loại bỏ được hầu hết các tạp chất, phản ứng diễn ra đơn giản và dễ dàng hơn.

Điểm 2: cách tiếp cận kỹ thuật elisa

Elisa cạnh tranh

ELISA cạnh tranh là một phương pháp ELISA rất hiệu quả để định lượng một lượng nhỏ các nguyên tố có trong mẫu. ELISA cạnh tranh sử dụng một lượng kháng nguyên cùng loại với kháng nguyên mà chúng ta muốn định lượng trong mẫu (kháng nguyên cạnh tranh) để phản ứng miễn dịch với cùng một kháng thể cụ thể được cố định trên bề mặt rắn, và sau đó vượt qua hoạt động của enzym liên kết với nó. Càng có nhiều kháng nguyên cạnh tranh thì khả năng kháng nguyên đó trong mẫu càng ít và ngược lại.

3. Những lưu ý khi sử dụng công nghệ elisa

Vì công nghệ ELISA là công nghệ miễn dịch bán tự động nên kết quả xét nghiệm sẽ bị ảnh hưởng rất nhiều bởi các yếu tố như con người, dụng cụ vận hành, hóa chất, thiết bị phân tích, v.v. Để quản lý chất lượng công nghệ xét nghiệm elisa cần tuân thủ nghiêm ngặt các quy trình đối với từng đợt xét nghiệm.

3.1. Công cụ và Hóa chất

– Ống nghiệm.

– Giá đựng ống nghiệm.

– Micropipet có thể tích khác nhau từ 1 ^ l đến 1000 ^ l.

– Một đầu mút loại bằng nhựa gắn vào micipet.

– giấy thấm.

– máy giặt elisa.

– người đọc elisa.

Xem Thêm : Pháp Luân Đại Pháp Hảo, Chân Thiện Nhẫn Hảo

– Bộ hóa chất bao gồm:

+ Dính nhựa có kháng nguyên / kháng thể + dung dịch rửa.

+ Hiệu chỉnh + Kiểm soát tiêu cực + Kiểm soát tích cực.

+ Bổ sung.

+ Chất nền.

+ Chất pha loãng huyết thanh.

+ Chất phản ứng.

3.2. Mẫu bệnh phẩm

+ Cho mẫu máu tĩnh mạch vào các ống sạch không có chất chống đông hoặc có chất chống đông (heparin / EDTA) theo yêu cầu cho mỗi lần xét nghiệm.

+ Mỗi mẫu máu sẽ được cho vào một ống riêng có mã vạch và họ tên, có nắp vặn.

+ Mẫu máu được cho vào hộp kín và chuyển đến phòng xét nghiệm càng sớm càng tốt.

+ Thông thường, mẫu máu để xét nghiệm ELISA ổn định trong 12 giờ ở nhiệt độ phòng 20 – 25 ºc và 24 – 48 giờ ở 2 – 8 ºc.

+ Trong phòng thí nghiệm, các mẫu máu sẽ được phân bổ đến các khu vực nơi mỗi xét nghiệm được thực hiện riêng lẻ và số mẫu sẽ được mã hóa trên cơ sở dịch vụ cho mỗi lần xét nghiệm để ngăn ngừa lây nhiễm chéo hoặc trộn lẫn mẫu.

3.3. Quản lý chất lượng

Công nghệ elisa là công nghệ miễn dịch bán tự động nên việc kiểm tra chất lượng trong quá trình phát hiện bệnh đóng vai trò cực kỳ quan trọng. Cần thiết lập các quy trình kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt ở mọi bước:

+ Trước khi xét nghiệm: Bệnh phẩm phải đạt yêu cầu, không có hồng cầu bị tổn thương, không bị nhiễm trùng, nồng độ lipid máu cao cũng sẽ ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

+ Trong Thử nghiệm: Hiệu chuẩn và kiểm soát được thực hiện trong mỗi lần thực hiện mẫu theo yêu cầu của từng bộ thử nghiệm.

+ Hậu kiểm: Kết quả mẫu của bệnh nhân sẽ chỉ được chấp nhận nếu các đường hiệu chuẩn và kiểm soát được chạy đồng thời và kết quả tốt. Sau khi phân tích xong, nên sử dụng phần mềm để ghi kết quả trực tiếp, tránh ghi thủ công dẫn đến kết quả không chính xác do sai sót khi ghi sổ.

3.4. Quy trình kỹ thuật

Làm theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Quy trình này bao gồm các bước chính sau:

Bước 1: Đặt mẫu bệnh phẩm, đối chứng âm tính, đối chứng dương tính vào giếng nhựa có gắn kháng nguyên / kháng thể. Ủ ở nhiệt độ phòng hoặc 37ºc thời gian ủ theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Xem Thêm : Tìm Hiểu Cơ Bản Về Flow Trong RAP Là Gì ?

Bước 2: Rửa giếng bằng đệm PBS – tween 20 và thấm khô bằng khăn giấy.

Bước 3: Thêm chất liên hợp vào từng giếng và ủ ở nhiệt độ phòng hoặc 37 ºc trong thời gian theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Bước 4: Rửa giếng bằng đệm PBS – tween 20 và thấm khô bằng khăn giấy.

Bước 5: Cho chất nền vào từng giếng và đợi màu xuất hiện (15-30 phút).

Bước 6: Để dung dịch ngừng phản ứng.

Bước 7: Đọc kết quả bằng trình đọc vi tấm tự động

Bump 3: phản ứng bánh sandwich elisa

Tóm lại, mọi bước của quy trình kỹ thuật elisa đều có khả năng ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm nếu kỹ thuật viên không tuân theo các quy trình đã thiết lập. Các yếu tố rủi ro phổ biến có thể dẫn đến kết quả sai lầm là:

+ Thuốc thử không được phép ổn định ở nhiệt độ phòng trước khi thử nghiệm.

+ Sai thể tích mẫu đã pha loãng hút, sai thể tích thuốc thử.

+ Thời gian và nhiệt độ ủ không chính xác: dẫn đến âm tính hoặc dương tính giả.

<3

+ Kết quả không được đọc ngay sau khi nó ngừng phản hồi.

3.5. Đối số kết quả

– Ngưỡng dương tính có thể khác nhau đối với mỗi thử nghiệm. Diễn giải kết quả theo ngưỡng dương tính do nhà sản xuất đưa ra.

– Các xét nghiệm miễn dịch để phát hiện kháng thể cho kết quả gián tiếp, không phải giá trị tuyệt đối.

-Kết quả xác định cũng không thể loại trừ hoàn toàn không phải nhiễm trùng. Có thể là nhiễm trùng gần đây, hoặc thời gian nhiễm trùng có thể quá lâu hoặc kháng nguyên / kháng thể quá thấp không thể phát hiện bằng ELISA. . Trong những trường hợp có nghi ngờ về mặt lâm sàng, xét nghiệm nên được lặp lại sau 1-2 tuần. Nhiều xét nghiệm để theo dõi biến động kháng thể / kháng nguyên có giá trị hơn một xét nghiệm. Nếu cần, hãy kiểm tra lại bằng các kỹ thuật khác.

– Kết quả dương tính cũng không chắc chắn, vì kết quả dương tính giả có thể do phản ứng chéo giữa ký sinh trùng hoặc mầm bệnh gây ra.

Do đó, xét nghiệm miễn dịch tìm kháng nguyên / kháng thể không thể thay thế hoàn toàn xét nghiệm trực tiếp để chẩn đoán căn nguyên của bệnh. Kết quả xét nghiệm dù âm tính hay dương tính cần được xem xét cẩn thận kết hợp với yếu tố dịch tễ học hoặc xét nghiệm bổ sung (sinh học phân tử, nuôi cấy tế bào,…) và các hỗ trợ phi lâm sàng khác (xq, siêu âm,…).

Với đội ngũ chuyên gia, bác sĩ giàu kinh nghiệm, hệ thống máy móc hiện đại và quy trình quản lý chất lượng nghiêm ngặt (theo tiêu chuẩn iso 15189: 2012 ), công nghệ ELISA tại Bệnh viện Đa khoa medlatec luôn được đảm bảo sớm nhất và kết quả kiểm tra chính xác nhất. Mọi thắc mắc vui lòng liên hệ Tổng đài 1900 565656 để được tư vấn và giải đáp.